干細胞培養(yǎng)基的制備和使用是干細胞培養(yǎng)成功的關鍵，但在實際操作中需要注意多個細節(jié)以確保細胞活性、穩(wěn)定性和實驗可重復性。
1.嚴格遵循配方
根據(jù)干細胞類型選擇專用培養(yǎng)基配方，不可隨意替換成分或調(diào)整比例（如生長因子濃度、血清批號）。
例：多能干細胞依賴bFGF和LIF維持未分化狀態(tài)，神經(jīng)干細胞需要EGF/FGF-2組合。
2.無菌操作
全程在超凈工作臺內(nèi)操作，避免微生物污染（尤其血清、添加劑易滋生細菌）。
分裝后的培養(yǎng)基需抽樣檢測無菌性（如細菌培養(yǎng)試驗）。
3.現(xiàn)配現(xiàn)用原則
生長因子和活性成分需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復凍融失效。
長期儲存需冷凍，使用時快速解凍并一次性用完。
4.過濾除菌
使用濾膜正壓過濾，避免高壓滅菌（高溫會破壞生長因子和蛋白質(zhì)成分）。
5.保存條件
短期保存：4℃冷藏（≤1周），避免反復開蓋污染。
長期儲存：分裝后-20℃~-80℃冷凍，標注名稱、濃度和日期。
干細胞培養(yǎng)基關鍵注意事項：
1.無菌操作
全程在超凈工作臺內(nèi)完成，避免微生物污染（尤其血清和添加劑易滋生細菌）。
分裝后培養(yǎng)基可抽樣檢測無菌性（如細菌培養(yǎng)試驗）。
2.成分穩(wěn)定性
生長因子、β-ME等活性成分需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復凍融。
長期儲存需冷凍，使用時快速解凍并一次性用完。
3.批次一致性
不同批次的血清或基礎培養(yǎng)基可能存在差異，需通過預實驗驗證穩(wěn)定性。
建議使用同一批號血清，并記錄詳細信息（如供應商、生產(chǎn)日期）。
更新時間：2025-05-26
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